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      今天主要來講講熒光定量PCR檢測原理
      熒光定量PCR光學檢測系統:
      1、光源:五個LED,各LED激發波長不同,保證每個通道的熒光素由優質的激發光激發。
      2、探測器:CCD,確保整板同時檢測,數據間可比性強。
      3、激發波長范圍:475nm-640nm。
      4 發射波長范圍:520nm-740nm。
      5、五個檢測通道:可同時能做四色檢測。
      6、線性范圍:11個數量級。
      7、靈敏度:可檢測到單拷貝。
      所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
      檢測方法:
      1、SYBRGreenⅠ法:
      在PCR反應體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料特異性地摻入DNA雙鏈后,發射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產物的增加完全同步。
      SYBR定量PCR擴增熒光曲線圖
      PCR產物熔解曲線圖(單一峰圖表明PCR擴增產物的單一性)。
      2、TaqMan探針法:
      探針完整時,報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收;PCR擴增時,Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解,使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離,從而熒光監測系統可接收到熒光信號,即每擴增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物的形成完全同步。

      上海睿玥實驗器材有限公司主營產品:全自動熔點測定儀,梯度PCR基因擴增儀,平行反應合成儀
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